Recuento de enterococos fecales por filtración
Objetivo
Contar las
UFC/ml de enterococos fecales en 100 ml.
Fundamento
El hábitat
normal de los enterococos fecales es el tubo digestivo de animales de sangre
caliente. Son indicadores de contaminación fecal, por lo que su presencia en
los alimentos indica falta de higiene o defectuosas condiciones de
conservación, excepto en alimentos en los que interviene como flora bacteriana
natural de procesos fermentativos, como es el caso de quesos, embutidos crudos
e incluso productos cárnicos.
Son muy
resistentes a condiciones adversas (congelación, desecación, tratamiento
térmico, etc.) por lo que son buenos indicadores para valorar las condiciones
higiénicas y de conservación de los alimentos congelados y desecados.
Materiales
Vaso de precipitado
Embudo
Probeta 100 ml
Pipeta Pasteur
Matraz Kitasato
Alcohol
Agua Destilada Estéril
Placa Petri estéril
Pinzas
Mechero Bunsen
Filtro reticulado
Procedimiento
Cogemos 50
ml de agua destilada estéril y 50 ml de agua de muestra, vertimos y enrasamos
en la probeta con la pipeta Pasteur, y llevamos a 100 ml.
Una vez
hecho este paso, procedemos a filtrar al vacío la mezcla.
Preparamos
el lugar de trabajo montando el matraz kitasato con sus partes y el aparato de
vacío. También encendemos el mechero bunsen, para así tener condiciones de
esterilidad, también preparamos una placa Petri estéril donde colocaremos el
agua destilada estéril, para despegar la parte sobrante del filtro con
retícula, y un vaso con alcohol para esterilizar los materiales que vayamos a
usar.
Flameamos
las pinzas para coger así la retícula y lo pasamos a la placa Petri con agua
destilada para eliminar la parte pegada.
Una vez
tengamos nuestro filtro, lo pasamos al kitasato que tendremos ya colocado, y
una vez allí vamos a poner el filtro encima del Kitasato y cerramos con el
embudo para filtrar, ponemos las pinzas de seguridad para que no se vaya a caer
el embudo
Encendemos
la bomba de vacío, y el agua irá pasando por el filtro de forma rápida.
Una vez que
el agua se ha terminado de filtrar, apagamos el aparato y quitamos las pinzas,
volvemos a esterilizar las pinzas par coger asi nuestra retícula y pasarla muy
rápidamente a una placa de medio PCA y rotulamos dicha placa.
Por último
guardar el cultivo boca abajo y a una temperatura de 35-37ºC por ser mesófilos.
