Siembra
y lectura de turbidez en agua peptonada
Objetivos
Realizar una siembra de una muestra liquida de agua
peptonada y medir la turbidez mediante la escala de Mcfarland.
Fundamentos
El agua peptonada es un medio de enriquecimiento no
selectivo, recomendado para ser utilizado en lugar de solución fisiológica para
recuperar células de enterobacterias dañadas por procesos fisicoquímicos
Material
Agua peptonada
Agua muestra
Asa de siembra
Mechero bunsen
Vasos de precipitado
Agua destilada
Mechero
Gradilla
Procedimiento
En primer lugar encendemos el mechero para tener buenas condiciones de esterilidad
para poder comenzar con la siembra. Cogemos el tubo que vayamos a sembrar y con
la otra mano cogemos el asa de siembra y esterilizamos la punta hasta dejarla
candente.Cojemos nuestro medio de agua peptonada, lo abrimos, esterilizamos la
boquilla y dejamos el tapón agarrado, cogemos con el asa de siembra del agua de
muestra y lo introducimos en el agua peptonada. Introducimos el asa de siembra
en el interior del tubo. Sacamos el asa de siembra, volvemos a esterilizar y la
dejamos. Volvemos a esterilizar la boquilla del tubo y la cerramos rotulando el
tubo. Ponemos los tubos en una gradilla y los llevamos a la estufa a una temperatura
de 37ºC/24h. Para que proliferen los microorganismos. Para medir la turbidez, cogemos
los tubos en los que han proliferado los microorganismos y ponemos en el espectrofotómetro un tubo de
agua peptonada sin sembrar como blanco, luego metemos el tubo de agua peptonada
sembrado y apuntamos su absorbancia. Teniendo la absorbancia del tubo de agua
peptonada sembrada, podemos calcular la UFC.
Resultado
y = 0.61508 + 0.00036x
0.830 = 0.61508 + 0.00036x
x = (0.830 - 0.61508) / 0.00036 = 597x10^8 UFC/ml
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