Practica 13 / Sesión 10 - Medición absorbancia escala de Mcfarland

Medición absorbancia escala de Mcfarland

Objetivos

Medir la absorbancia de los tubos de Mcfarland

Fundamentos

Como referencia en suspensiones bacteriológicas para saber que el número de bacterias por mililitro, o más bien en UFC según una escala que va de 0.5 a 10. Estos estándares son creados al mezclar soluciones de cloruro de bario al 1% con ácido sulfúrico al 1% en volúmenes específicos, para asegurar la densidad correcta se puede controlar usando espectrofotómetros.

La espectrofotometría es la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe o transmite un sistema químico en función de la longitud de onda; es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones químicas y bioquímicas. El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.

Materiales

Regla

Calculadora

Tubos de Mcfarland

Material para escribir

Agua destilada estéril

Espectrofotómetro

Procedimiento

En primer lugar nos vamos hacia el espectrofotómetro, comenzaremos encendiéndolo y dejamos que se calibre. Una vez calibrado le damos al botón “Go to LW”, ponemos la absorbancia en 550nm y lo ponemos en modo absorbancia. Introducimos primero el “blanco” con agua destilada estéril, con el que vamos a dejar al aparato en autocero. De los tubos de la Escala de Mcfarland elegimos cuales queremos que sean los representativos para hacer nuestra recta de calibrado, en nuestro grupo hemos cogido los siguientes tubos: 0, 0.5, 3, 5 y 6. Iremos metiendo tubo por tubo en sus respectivas cubetas y apuntando la absorbancia de cada uno.

Al saber la absorbancia de cada uno de los tubos ya sabemos la (y) y el UFC ya lo sabíamos de cada tubo (x) por lo que podemos comenzar con nuestra recta de calibrado.

Resultado

Siguiente práctica.