Practica 11 / Sesión 8 - Recuento coliformes totales por filtración

RECUENTO COLIFORMES TOTALES POR FILTRACIÓN

OBJETIVO

Contar las UFC/ml de coliformes totales en 100 ml de muestra, a través de filtración al vacío, en un medio ENDO.

FUNDAMENTO

Los coliformes totales son las Enterobacteriaceae lactosa-positivas y constituyen un grupo de bacterias que se definen más por las pruebas usadas para su aislamiento que por criterios taxonómicos. Pertenecen a la familia Enterobacteriaceae y se caracterizan por su capacidad para fermentar la lactosa con producción de ácido y gas, más o menos rápidamente, en un periodo de 48 horas y con una temperatura de incubación comprendida entre 30-37ºC.

Son bacilos gramnegativos, aerobios y anaerobios facultativos, no esporulados. Del grupo “coliforme” forman parte varios géneros: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter, etc. Se encuentran en el intestino del hombre y de los animales, pero también en otros ambientes: agua, suelo, plantas, cáscara de huevo, etc.
Una elevada proporción de los coliformes que existen en los sistemas de distribución no se debe a un fallo en el tratamiento en la planta, sino a un recrecimiento de las bacterias en las conducciones. Dado que es difícil distinguir entre recrecimiento de coliformes y nuevas contaminaciones, se admite que todas las apariciones de coliformes son nuevas contaminaciones, mientras no se demuestre lo contrario.

MATERIALES

Vaso de precipitado

Embudo

Probeta 100 ml

Pipeta Pasteur

Matraz Kitasato

Alcohol

Placa Petri estéril

Pinzas

Mechero Bunsen

Mechero

Filtro reticulado

PROCEDIMIENTO

(Mismo método que la filtración)

Preparamos el lugar de trabajo montando el matraz kitasato con sus partes y el aparato de vacío. También encendemos el mechero bunsen, para así tener condiciones de esterilidad, también preparamos una placa Petri estéril donde colocaremos el agua destilada estéril, para despegar la parte sobrante del filtro con retícula, y un vaso con alcohol para esterilizar los materiales que vayamos a usar.

Flameamos las pinzas para coger así la retícula y lo pasamos a la placa Petri con agua destilada para eliminar la parte pegada.

Una vez tengamos nuestro filtro, lo pasamos al kitasato que tendremos ya colocado, y una vez allí vamos a poner el filtro encima del Kitasato y cerramos con el embudo para filtrar, ponemos las pinzas de seguridad para que no se vaya a caer el embudo

Encendemos la bomba de vacío, y  el agua irá pasando por el filtro de forma rápida.

Una vez que el agua se ha terminado de filtrar, apagamos el aparato y quitamos las pinzas, volvemos a esterilizar las pinzas par coger asi nuestra retícula y pasarla muy rápidamente a una placa de medio PCA y rotulamos dicha placa.

Por último guardar el cultivo boca abajo y a una temperatura de 35-37ºC por ser mesófilos.

CÁLCULO

No importa porque salió menos de 30 UFC.