PRÁCTICA
12 SESIÓN 9 RECUENTO DE COLIFORMES FECALES EN PLACA
OBJETIVO
El objetivo de esta práctica consiste en determinar el
número de coliformes fecales que se encuentran en un cultivo microbiano.
FUNDAMENTOS
Es un medio selectivo y diferencial, adecuado para el crecimiento de enterobacterias, que inhibe el crecimiento de bacterias Gram positivas y permite la diferenciación de bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa, dando lugar a colonias incoloras, las no fermentadoras, y colonias de color azulado-negro con cierto brillo metálico, las fermentadoras
MATERIALES
Y REACTIVOS
4 tubos de ensayo, una gradilla, agua destilada estéril,
muestra de agua, mechero, micropipeta, placas Petri con agar Levine, boquillas
de la micropipeta estériles, pipeta de 10 ml con su pipeteador, asa de
digralsky.
PROCEDIMIENTOS
En primer lugar tenemos que realizar una serie de
diluciones seriadas que utilizaremos para posteriormente realizar la siembra en placa.
Pondremos 4 tubos de ensayo en una gradilla y echaremos en
cada uno de ellos 9 ml de agua destilada estéril que cogeremos con una pipeta
de 10 ml, esta agua la tendremos preparada previamente. Una vez que le hemos
echado el agua destilada estéril, cogeremos con una micropipeta, 1ml de agua de
la muestra que echaremos en el tubo 1, después, le cambiaremos la punta a la
micropipeta, y cogeremos otra nueva para ahora, coger 1ml del tubo 1 y
echárselo al tubo 2, le volveremos a cambiar la punta a la micropipeta y
cogeremos 1ml al tubo 2 y se lo echaremos al tubo 3 y por último le volveremos
a cambiar la punta a la micropipeta para ponerle otra punta estéril y cogeremos
1 ml del tubo 3, para echárselo por último al tubo 4. Con esto conseguiremos 4
tubos con el mililitro de la muestra totalmente diluido.
Una vez que tengamos preparados los tubos, procederemos a
realizar la siembra en las placas Petri. Aquí utilizaremos nuestro mechero
bunsen para mantener buenas condiciones de esterilidad, y utilizaremos 4 placas
Petri con agar Levine para cada uno de los tubos. Una vez que tenemos nuestro
mechero encendido, comenzaremos la siembra.
Cogeremos la micropipeta, y con una punta estéril, la
graduaremos para que coja únicamente 1 ml del tubo 1, iremos echando desde el
tubo más concentrado al tubo menos concentrado en cada una de las placas. Ese
mililitro lo echaremos en la placa Petri e inmediatamente de haberlo echado, lo
repartiremos con el Asa de digralsky, que es un instrumento que se utiliza para
repartir por toda la placa de forma uniforme toda la muestra.
Este proceso lo realizaremos con las 4 placas. Una vez
terminado, rotularemos cada placa poniendo en cada una de ellas la fecha en la
que se ha realizado la siembra, lo que se está sembrando y en este caso el
número del tubo al que corresponde la muestra.
Dejaremos secar las placas hasta que el líquido se haya
absorbido casi en su totalidad.
Por último, llevaremos las placas a la estufa, que estará a
una temperatura de 44º para que puedan proliferar bien los microrganismos.
Después de dejarlas 24 horas aproximadamente proliferar,
las sacaremos de la estufa y podremos realizar el recuento de coliformes
fecales.
Para hacer el recuento tenemos varias formas, en primer
lugar podemos usar el método del contador de colonias, que es un aparato con
luz, un puntero y una pantalla digital, en el que cada vez que pulsas te cuenta
una UFC (unidad formadora de colonia), y también podemos realizarlo a ojo,
contando las UFC de solo una mitad y luego multiplicarlo por dos para obtener
el número concreto que hay en la placa.
CÁLCULO
Y RESULTADOS
Finalmente utilizaremos una fórmula, para obtener el número
de UFC que hay en una placa.
Nuestros
resultados fueron los siguientes:
UFC/ml=
570.10/1= 5700 UFC/ml
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