SIEMBRA
DE MICROORGANISMOS
Objetivo
Aprender las técnicas de preparación de diferentes medios
de cultivo y manipulación de microorganismos en condiciones de esterilidad.
Fundamento
Sembrar es introducir una porción de muestra en un medio adecuado, con el fin de iniciar un
cultivo microbiano, para su desarrollo y multiplicación.
Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una
temperatura adecuada para el crecimiento.
Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:
Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:
-Que se efectúen asépticamente
-Que los medios de cultivo y el instrumental a
utilizar estén esterilizados
-Que se realicen solo los manipuleos
indispensables
-Que se trabaje fuera de toda corriente de
aire. Utilizando para ello un mechero bunsen.
Materiales
y reactivos
Erlenmeyer de 250 ml o botella con tapón de rosca, Espátula,
Vidrio de reloj, Agar, Peso para pesar la cantidad de agar necesario, Placas
Petri estériles, Microondas, Agua destilada, Espátulas de Drigalsky, Asa de
platino, Tubos de ensayo, Muestra a analizar, Algodón y gasa, Agua de peptona, Mechero
Bunsen, Permanente, Autoclave.
Procedimiento
Existen diferentes tipos de siembra de acuerdo al medio
utilizado y los requerimientos del microorganismo a estudiar.
Medios
sólidos
-Siembra
por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de
Petri y sobre el mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este
método se utiliza para microorganismos aerobios.
-Siembra
en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de
cultivo fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el
inóculo. Con ayuda de una espátula de Drigalsky se extiende el inóculo hasta su
absorción total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra se recomienda
para microorganismos aerobios estrictos.
-Siembra
en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo
fundido y se deja solidificar.
Existen distintas técnicas para la siembra en estrías, el
objetivo es obtener colonias aisladas:
-Técnica
A:
Consiste en cargar el asa con la muestra y hacer estrías paralelas en la
cuarta parte de la superficie de la placa, se quema el asa, se enfría, se gira
la placa a 90° y se vuelve a estriar tocando 3 o 4 veces el área sembrada
inicialmente y cubriendo otro cuarto de la placa. Por último, sin quemar el
asa, se estría el resto de la superficie sin sembrar.
-Técnica
B:
Con el asa cargada se hacen 3 o 4 estrías; se quema el asa, se hacen 3 o 4
estrías perpendiculares a las anteriores, se quema el asa y se repite el
procedimiento hasta agotar la superficie de la placa.
-Siembra
en agar en tubo inclinado o bisel: Se colocan 5 ml de medio de
cultivo fundido y estéril, se inclina el tubo y se deja enfriar.
El inóculo se siembra, con
ayuda de un asa, de la siguiente manera:
-En
profundidad con asa de punta: se pica con el asa el
cultivo a sembrar y se introduce mediante punción en el medio contenido en la
parte inferior del tubo.
-En
superficie con asa de aro: se pica con el asa el cultivo a sembrar
y se esparce el mismo sobre la superficie en bisel en forma de zigzag.
Metodo de siembra en medio líquido: Se trata de, mediante el asa,
colectar microorganismos de la muestra e introducirlos a continuación en un
medio de agua peptonada.
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