Practica 15 / Sesión 11 - Recuento de enterococos fecales por filtración

Recuento de enterococos fecales por filtración

Objetivo

Contar las UFC/ml de enterococos fecales en 100 ml.

Fundamento

El hábitat normal de los enterococos fecales es el tubo digestivo de animales de sangre caliente. Son indicadores de contaminación fecal, por lo que su presencia en los alimentos indica falta de higiene o defectuosas condiciones de conservación, excepto en alimentos en los que interviene como flora bacteriana natural de procesos fermentativos, como es el caso de quesos, embutidos crudos e incluso productos cárnicos.

Son muy resistentes a condiciones adversas (congelación, desecación, tratamiento térmico, etc.) por lo que son buenos indicadores para valorar las condiciones higiénicas y de conservación de los alimentos congelados y desecados.

Materiales

Vaso de precipitado

Embudo

Probeta 100 ml

Pipeta Pasteur

Matraz Kitasato

Alcohol

Agua Destilada Estéril

Placa Petri estéril

Pinzas

Mechero Bunsen

Filtro reticulado

Procedimiento

Cogemos 50 ml de agua destilada estéril y 50 ml de agua de muestra, vertimos y enrasamos en la probeta con la pipeta Pasteur, y llevamos a 100 ml.

Una vez hecho este paso, procedemos a filtrar al vacío la mezcla.

Preparamos el lugar de trabajo montando el matraz kitasato con sus partes y el aparato de vacío. También encendemos el mechero bunsen, para así tener condiciones de esterilidad, también preparamos una placa Petri estéril donde colocaremos el agua destilada estéril, para despegar la parte sobrante del filtro con retícula, y un vaso con alcohol para esterilizar los materiales que vayamos a usar.

Flameamos las pinzas para coger así la retícula y lo pasamos a la placa Petri con agua destilada para eliminar la parte pegada.

Una vez tengamos nuestro filtro, lo pasamos al kitasato que tendremos ya colocado, y una vez allí vamos a poner el filtro encima del Kitasato y cerramos con el embudo para filtrar, ponemos las pinzas de seguridad para que no se vaya a caer el embudo

Encendemos la bomba de vacío, y  el agua irá pasando por el filtro de forma rápida.

Una vez que el agua se ha terminado de filtrar, apagamos el aparato y quitamos las pinzas, volvemos a esterilizar las pinzas par coger asi nuestra retícula y pasarla muy rápidamente a una placa de medio PCA y rotulamos dicha placa.

Por último guardar el cultivo boca abajo y a una temperatura de 35-37ºC por ser mesófilos.