RECUENTO
EN PLACA DE SALMONELLA
Objetivo
Cultivar salmonella en placa y hacer recuento de la misma.
Fundamentos
El agar verde brillante es un medio de
cultivo selectivo y diferencial.
La selectividad, está dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.
La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formación de sulfuro de hierro.
Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en Selenito caldo (B02-120-05).
La selectividad, está dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.
La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formación de sulfuro de hierro.
Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en Selenito caldo (B02-120-05).
Materiales
- Medio Verde Brillante
- Asa de siembra de Digralsky
- Placas de petry
- Alcohol
- Mechero bunsen
- Micro pipeta de 1ml
- Vasos de precipitado
- Agua destilada
-
4 Tubos de ensayo
- Mechero
- Gradilla
Procedimientos
Se cogen 4 tubos a los que echaremos 9 ml de agua
destilada estéril y después se realizan una serie de diluciones seriadas a 1:10
en las cuales se coge de la muestra 1 ml. que se echará en el primer tubo, del
primer tubo se coge 1 ml. y se echa en el segundo, continuamos con la dilución hasta
el 4 y ultimo tubo, para así conseguir una dilución desde el tubo 1 hasta el último.
Posteriormente, se le introduce 1
ml., de cada tubo en una placa diferente. Se coge el asa de Digralsky y se
reparte uniformemente en la superficie del agar, hasta que se seque
completamente y más tarde se le da le vuelta.
Cultivar a 37* durante 24h.
Cálculos
272(colonias)
* 10(tubo 1/10) / 1(ml)= 2720 (UFC/ml)
Las
otras placas no se podían contar porque eran menos de 30 colonias
Resultados
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